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电化学发光免疫测定
时间:2015-09-06    来源:未知    作者:admin
 

    电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应,而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA/RNA探针检测。



其检测原理(以TSH检测为例):第一步:结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2+ + N羟基琥珀酰胺酯(NHS)的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。



第二步:将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中,再次孵育9分钟,使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体,形成双抗体夹心法。





下一步,蠕动泵将形成的[Ru(bpy)3]2+-抗体-抗原-抗体-磁珠复合体吸入流动测量室,此时,磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时,游离的TSH抗体(与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体)也被吸
出测量室。



紧接着,蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液,同时电极加电压,启动ECL反应过程。发光剂[Ru(bpy)3]2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应,使二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价,后者是一种强氧化剂;另一方面,TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+●,后者很不稳定,可自发失去一个质子(H+),形成自由基TPA●,这是一种很强的还原剂,可将一个电子给三价的[Ru(bpy)3]3+,使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+,而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(bpy)3]2+通过荧光机制衰减,发射出一个波长620nm的光子,重新生成基态的[Ru(bpy)3]2+。该过程在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,光电倍增管检测光强度,光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。






最后,终止电压,移开磁珠,加入清洗液冲洗流动测量室,准备下一个样品测定。


( 责任编辑:admin )

 
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